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无缝克隆是一种依赖同源序列的基因克隆技术,能够将任意含有载体末端重叠区域的 DNA 片段重组至线性化载体上。相对于传统PCR克隆,无需繁琐的酶切连接,不受酶切位点限制,载体自连背景极低,且能够同时连接多个片段,连接时间更短,连接效率更高。已广泛应用于基因工程、基因编辑等领域。
QuarCam Plus Seamless Cloning Kit是基于无缝克隆原理,针对多片段重组反应进行了优化,可以一次实现 1-12个插入片段(长度 50 bp-12 kb)的无缝拼接克隆,阳性克隆率高达96%。
无缝克隆原理实验图
产品特点
兼容:可兼容1-12个目标片段同时连接。
高效:高效克隆50 bp-12 kb片段,阳性克隆率高达96%。
便捷:一管式反应,线性化载体与插入片段可以不纯化直接用于重组反应。
数据展示
· 兼容单片段、多片段同源重组
图1. 插入1个和多个片段的阳性克隆鉴定结果
使用QuarCam Plus Seamless Cloning Kit分别进行1个和多个片段的重组实验,结果显示可兼容一个或者多个目标片段的插入连接。
(A) 带有重组质粒的大肠杆菌细胞在抗性平板上的生长情况。
(B) 插入1个片段的菌落PCR琼脂糖凝胶电泳检测结果。
(C) 插入4个片段的菌落PCR琼脂糖凝胶电泳检测结果。
(D) 插入10个片段的菌落PCR琼脂糖凝胶电泳检测结果。
· 克隆阳性率高
表1. 插入1个或多个片段的阳性克隆子统计
使用迪赢和友商产品分别进行1个、4个和10个片段的重组实验,重组产物转化平板后,分别从各自平板挑取24个克隆进行菌落PCR,琼脂糖凝胶电泳显示片段大小正确为阳性;挑取菌落PCR阳性克隆进行一代测序,重组区序列完全正确为阳性。结果显示不管是单片段还是多片段的重组实验 ,其阳性率均优于友商。
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