迪赢生物QuarStar Human MethylCap Panel(NX5001)系统覆盖CpG岛、CpG岛岸(shores)、CpG岛架(shelves)、启动子区域(±2 kb)、增强子区域(Enhancers)、差异甲基化区域(DMRs)、表观遗传关联位点(EWAS)、非编码RNA区域(lncRNA/miRNA)、疾病相关GWAS区域以及高保守性区域(高phyloP得分)等,上述位点均基于最新数据库注释信息筛选而来(表1)。
表1.人类甲基化组学研究超大Panel参考数据库

QuarStar Human MethylCap Panel覆盖了多款国内外主流甲基化大Panel和甲基化芯片产品的位点(图1-1,96.65-99.42%),并在此基础上新增近百万个高价值CpG位点,使其在覆盖范围与注释完整性方面处于行业领先水平(图1-2,图1-3)。
图1. QuarStar Human MethylCap Panel更全面的覆盖度

图1-1. QuarStar Human MethylCap Panel与主流甲基化芯片产品及甲基化大 Panel (VendorA、VendorB、VendorC、VendorD)覆盖重叠区域。
图1-2. QuarStar Human MethylCap Panel中CpG位点在各染色体的分布情况。
图1-3. QuarStar Human MethylCap Panel中CpG位点的区域分布情况(以碱基对计)。
迪赢生物在传统“四链法”探针设计基础上,引入独特的简并碱基(N/R/S/Y)合成策略,可以在同一个合成位点实现多条组合探针的合成,大幅降低了合成成本(图1)。

图2.甲基化探针设计原则:对于A、T、G位点直接取反向互补序列;对于非CpG位点的C,在探针上设计为A;CpG位点的C可能处于甲基化或非甲基化状态,在探针上设计为R(A/G)。
- 甲基化专用封闭试剂 QuarHyb DNA Methyl Enhancer
针对甲基化文库序列复杂低、GC含量下降的特点,迪赢生物开发了甲基化捕获增强剂——QuarHyb DNA Methyl Enhancer(NF5010)。该试剂在不影响Coverage和 Uniformity等关键指标的前提下,可提升封闭效果,显著降低脱靶率(图3)。

QuarStar Human MethylCap Panel具有优异的基本性能:TargetRatio 93.20%,Coverage 99.02%,Uniformity 98.47%(图4-1),并保持良好的重复性(皮尔逊相关系数为0.99,图4-2)。与WGBS进行一致性分析,甲基化水平呈现高度一致(图5,R=0.98),为学术研究及临床探索性研究提供了可靠选择。
图4. 优秀的基本性能,良好的实验重复性

图4-1. NA24385建库,使用QuarStar Human MethylCap Panel及迪赢甲基化专用杂交捕获试剂进行捕获。
图4-2. 100ng NA24385从建库至捕获进行两次重复实验,测序数据进行一致性分析。

图5. 与WGBS甲基化水平高度一致。 100 ng NA24385 DNA建库,分别进行WGBS和迪赢生物QuarStar Human MethylCap Panel捕获,选择交集的CpG位点进行一致性分析。