克隆阳性率高,兼容多片段同源重组
QuarCam Plus Seamless Cloning Kit (Ready Mix),NG1005是将优化的重组增强因子预混进重组试剂中。分别使用NG1005、常规Gibson试剂和国外友商试剂进行多片段组装实验,重组产物转化平板后,挑取克隆进行菌落PCR,琼脂糖凝胶电泳显示片段大小正确为菌落PCR阳性;挑取菌落PCR阳性克隆进行一代测序,重组区序列完全正确为阳性。结果显示增加了增强因子的NG1005,克隆阳性率有较大的提升,其阳性率优于友商。
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各类组装体系的正确组装比例(菌落PCR检测)
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| 体系 |
Gibson+Enhance(10kb分10段,1kb/段) |
| 样品 |
克隆子正确率 |
空载率%(蓝斑/总菌数) |
| 常规Gibson |
60%(6/10) |
64.5%(82/127) |
| N* |
80%(8/10) |
77.9%(92/118) |
| NG1005 |
90%(9/10) |
29.6%(40/135) |
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各类组装体系的正确组装比例(荧光检测)
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| 体系 |
Gibson+Enhance(1.5kb分10段,170bp/段) |
| 样品 |
荧光菌数/总菌数 |
克隆子正确率 |
| 常规Gibson |
322/354 |
90.9%(322/354) |
| N* |
168/189 |
88.9%(168/189) |
| NG1005 |
208/217 |
95.8%(208/217) |